Diabetologia：激活但功能受损的记忆Tregs在1型糖尿病患者实质性缓慢的过程中逐渐扩展

从第一次消失肝细胞自身抗棒状到消失1DF高血压诊断呕吐的十分困难领军在儿童初就有很好的说明了，多个肝细胞自身抗棒状感染性的儿童中都有70%在血清转换后10年内中风高血压，而随访15年的儿童这一比例增大到84%。来得之下，占有诊断1DF高血压一半以上的DF1DF高血压的患病机制还未想得到必要的统计分析。

愈加多的人开始运用于分期系统来定义1DF高血压的十分困难：个棒状在消失多种肝细胞自身抗棒状时重回第1先决条件，消失血糖异常时重回第2先决条件，消失呕吐时重回第3先决条件。一些多发肝细胞自身抗棒状感染性的个棒状，在1期和2期，十分困难较更为慢，并的发展为患病的1DF高血压。我们之前说明了了一第一组在首次侦测到多种肝细胞自身抗棒状样本后数10年无高血压的极更为慢十分困难者，这第一组病变人数少，但构造非常确切。随后，我们发掘出肝细胞自身淋巴细胞特异性CD8+T巨噬细胞自由基在十分困难缓更为慢的病变中都基本不存有，但在未来会患病和与此关的的高血压病变中都很容易侦测到。这不太可能确实，与十分困难病变来得，这些病变自身免疫自由基的闭环大幅提高。

早期统计分析确实，尽管闭环性T巨噬细胞(Treg)数量经常性，但高血压病变存有一些基本功能局限性，其中都以外对IL-2的自由基能力降低。此外，高血压病变中都的效应将CD4+T巨噬细胞不太可能对闭环更具抵抗性，观感为效应将T巨噬细胞的消除减弱，自然产生的Treg和棒状外产生的诱导Treg，以及淋巴细胞亲身经历的CD4+T巨噬细胞中都IL-2自由基减弱。本统计分析的目的是说明了了CD4+闭环性T巨噬细胞(Treg)在一小群极缓更为慢十分困难者中都的构造，他们的平均比率为43岁(31-72岁)，随访时间为18-32年。

方法：BOX统计分析是一项以一些人为基础的横向统计分析，在21岁以下确诊的病变亲属中都有益检查1DF高血压的危险因素所。我们之前说明了了长期缓更为慢十分困难者的构造，他们保持多重肝细胞自身抗棒状感染性超过10年，但未消失高血压的诊断呕吐，更为慢性或非顺利完成性自身免疫。随后，10名继续保持无高血压并愿意提供大量血液样本的缓更为慢十分困难者纳入T和B巨噬细胞基本功能统计分析。在目前的统计分析中都，8名更为慢十分困难者(SP第一组)，中都位比率43岁(31-72岁)，18 - 32岁中都间的肝细胞自身抗棒状感染性。所有的第一组织者都西北面1DF高血压十分困难的1期，尽管一些人随后失去了肝细胞自身抗棒状对某些淋巴细胞的感染性自由基，然而，一名病变从未西北面2期数6年，但未消失诊断呕吐，一名病变被治疗为高血压，该受试者72岁，在采集检验样本时，其HbA1c上升到53 mmol/mol(7%)，在数据统计分析中都对该供棒状顺利完成了单独评量。受控外周血单个质子巨噬细胞(PBMCs)，采用多参数流式巨噬细胞术和T巨噬细胞消除试验评量供棒状中都Treg的kHz、表DF和基本功能。运用于FlowSOM和CITRUS(聚类鉴定、表征和回归)顺利完成无全权负责聚类统计分析，评量Treg表DF。

结果：与有益供棒状来得，来自更为慢十分困难棒状的清醒CD4+T巨噬细胞的全权负责聚类辨识，激来时的清醒CD4+ TregkHz增大，与糖皮质激素诱导的TNFR关的亚基(GITR)表述增大有关。一名HbA1c上升的病变与十分困难缓更为慢者和冗余的对照第一组来得，Treg磬有所不同。基本功能统计分析确实，与有益供棒状来得，来自缓更为慢十分困难棒状的Treg介导的CD4+效应将T巨噬细胞消除相比来说受损。观感为对效应将CD4+T巨噬细胞CD25和CD134表述的消除增大。

示意图1 了解的表DF统计分析辨识，CD4+Treg变异在更为慢十分困难表头中都增大。由FlowSOM聚合的Treg三楼，聚集在来自所有供棒状的来时CD4+CD45RA -巨噬细胞上。根据标上物表述鉴定出10个元簇:清醒T巨噬细胞_1;清醒T cell_2;清醒T cell_3;清醒T cell_4;CD49b清醒T巨噬细胞;HLA-DR + GITR +清醒T巨噬细胞;本站程Treg_1;本站程Treg_2;本站程Treg_3;和本站程Treg_4。(a)运用于9个不同Treg标上聚合的10个元簇的MST。每个节点值得一提的是一个集群(100个集群)，极大的元集群(10个元集群)在节点第一组周围上色。每个节点中都的糕点示意图透露单个标上的表述级别。(b)每个元聚类的热示意图，以辨识整棒状标上表述。(c, d)为HD第一组(c)和SP第一组(d)聚合示意图，以及FlowSOM识别的每个元簇的覆盖层。(e-l)相比丰度为每个metacluster装有本站示意图(丰度> 0.05%)断定为HD和SP第一组:本站程Treg_2 (e),本站程Treg_3 (f),本站程Treg_4 (g), HLA-DR + GITR +清醒T巨噬细胞(h)、清醒T cell_1(i),清醒T cell_2 (j),清醒T cell_3 (k) n d CD49b清醒T巨噬细胞(l)。浅蓝色左上方值得一提的是ACSSP 606。**p< 0.01, Wilcoxon以此类推符号秩检验。此键适用于示意图形部分(a)， (c)， (d)和d (e-l)

示意图2 运用于CITRUS的预测属实，TregkHz的增大是十分困难缓更为慢的标志。AO旁路(a - f)和柑橘统计分析(g-k)更为SP第一组织者和冗余的HD第一组织者在CD4+CD45RA−T巨噬细胞上的差异。(a)亲本CD25+ cd127 lotreg和CD25loCD127+T c e l群棒状的值得一提的是性示意图。CD25+ cd127lotreg被CD39和FOXP3富集，然后通过HLA-DR和GITR表述顺利完成受控，模拟FlowSOM群棒状。(b) HD(黑点)和SP(布氏)第一组以及供棒状SP 606(浅蓝色)中都CD25+ cd127的kHz汇总示意图。(c-f) CD25+CD127loCD39+FOXP3+和CD25loCD127+旁路偏序的装有本站示意图;(c) HLA-DRloGITR−(本站程Treg_2)， (d) HLA-DRintGITRlo(本站程Treg_3)， (e) HLA- d RhiGITR+(本站程Treg_4)， (f) HLA- d RhiGITR+(HLA-DR+GITR+本站程T cell)。(g - i)柑桔簇螺旋由(g) CD127， (h) CD25和(i) FOXP3表述其中心制做，箭头突出的簇被识别为SP和HD表头中都间的不同。(j)装有本站示意图辨识了在SP(布氏)和HD(灰点)第一组中都，CITRUS清醒Treg_3和Treg_4的相比丰度(比例)。(k)直方示意图辨识每个簇的表DF(粉红色)和Treg标上相比表述与背景表述(浅蓝色);上列，本站程Treg_3;下面一行，本站程Treg_4。背景与所有其他簇中都标上的表述有关。*p< 0.05， **p< 0.01, Wilcoxon以此类推符号秩检验

示意图3 与有益献血者来得，十分困难缓更为慢者清醒treg的GITR增大。每个清醒CD4+T巨噬细胞元簇(清醒T巨噬细胞_1;清醒T cell_2;清醒T cell_3;CD49b +清醒T巨噬细胞;HLA-DR + GITR +清醒T巨噬细胞;本站程Treg_2;本站程Treg_3;来自FlowSOM的memory Treg_4)侦测每个表述标上的变化。(a,b)来自HD (a)和S (b)表头的表述热示意图(sp606不以外在内)。(c,d)清醒Treg_4元簇中都所有HD(灰色)、所有SP(浅蓝色)和SP 606(浅蓝色)的FlowSOM GITR表述串联，辨识直方示意图(c)和汇总示意图(d)。Wilcoxon以此类推符号秩和检验，p< 0.07(浅蓝色)所有供棒状以外，p< 0.05(浅蓝色)供棒状SP 606和冗余的HD不以外在测试中都。(e,f) HLA-DRhiGITR+Tregs中都GITR表述，从AO旁路，从所有HD(灰色)、所有SP(浅蓝色)和SP 606(浅蓝色)串联，辨识直方示意图(e)和汇总示意图(f) *p< 0.05, Wilcoxon以此类推符号秩检验

示意图4 来自缓更为慢十分困难的CD4+ treg巨噬细胞依靠效应将CD4+T巨噬细胞的能力降低。SP第一组用浅蓝色的本站和左上方透露，HD第一组用黑色的本站和左上方透露，浅蓝色的本站/左上方透露供棒状sp606。运用于CD4+CD25+ Treg分选试剂盒对CD4+T巨噬细胞顺利完成分选。CD4+CD25−(反之亦然者)被标上为CFSE, Treg按检视的比例硫酸铜。用抗CD3 /28微珠酪氨酸巨噬细胞，养成3天后顺利完成流式巨噬细胞术侦测。(a-d)与CD4+反之亦然者相比应将的treg养成(自棒状)(e-h) HD、SP或SP 606 Treg与HD反之亦然者养成。(a,b,f) CFSE增殖(a,e)和CFSE消除百分比(b,f)。(c, d,h) CD25 (c,g)和CD134 (d,h)的消除百分比。运用于感染性对照(激来时的响应将巨噬细胞不含treg)近似值消除百分比。*p< 0.05， **p< 0.01， ***p< 0.001，重复测量双向方差统计分析。†p < 0.0 5 Bonferroni的事后多重更为测试

示意图5 效应将CD4+T巨噬细胞对缓更为慢十分困难的T巨噬细胞酪氨酸的消除更敏感。SP第一组用浅蓝色的本站和左上方透露，HD第一组用黑色的本站和左上方透露，浅蓝色的本站/左上方透露供棒状sp606。运用于CD4+CD25+Treg分选试剂盒对CD4+T巨噬细胞顺利完成分选。CD4+CD25−(反之亦然者)被cfsel标上，treg按检视的比例硫酸铜。用抗CD3 /28微珠酪氨酸巨噬细胞，养成3天后顺利完成流式巨噬细胞术(CD25反染)和巨噬细胞因长子统计分析。HD Treg与HD、SP或sp606反之亦然者共同养成。(a,b) CFSE增殖(a)和CFSE消除百分领军(b)。(c,d) CD25消除百分领军(c)和CD134消除百分领军(d)。(e,f) IFN-γ(e)和IL-17A (f)在共养成中都的表述。***p< 0.001， **p< 0.01，重复测量双向方差统计分析。†p < 0.0 5 Bonferroni的事后多重更为测试

论点：我们得出的论点是，来自缓更为慢十分困难长子的酪氨酸清醒CD4+Treg在GITR表述中都想得到了扩展和丰富，强调了有利于统计分析Treg在1DF高血压不确定性个棒状中都的异质性的必要性。

原文说是：

Boldison J, Long AE, Aitken RJ,et al.Activated but functionally impaired memory Tregs are expanded in slow progressors to type 1 diabetes.Diabetologia 2021 Oct 28