Diabetologia：激活但功能受损的记忆Tregs在1型糖尿病患者进展较快的过程中逐渐扩展

从第一次不止现胰脏自身抗本体到不止现1型号哮喘临床研究病因的十分困难率在儿童初就有很好的揭示，多个胰脏自身抗本体非典型号的儿童中都有70%在血清转换后10天内患上哮喘，而随访15年的儿童这一比例减小到84%。正因如此之下，占临床研究1型号哮喘一半以上的型号1型号哮喘的病症机制还无法得不到充分的研究课题。

日益多的人开始可用分阶段性系统来定义1型号哮喘的十分困难：个本体在不止现多种胰脏自身抗本体时带入第1阶段性，不止现皮质醇异常时带入第2阶段性，不止现病因时带入第3阶段性。一些多发胰脏自身抗本体非典型号的个本体，在1期和2期，十分困难较慢速，并发展为病症的1型号哮喘。我们之前揭示了一组成员在首次样品到多种胰脏自身抗本体采样后多于10年无哮喘的极慢速十分困难者，这组成员症状人数少，但形态并不明确。随后，我们发现胰脏自身上皮细胞会特异性CD8+T细胞会底物在十分困难较快的症状中都原则上不存在，但在近来病症和肇因的哮喘症状中都很很难样品到。这确实证明，与十分困难症状正因如此，这些症状免疫性底物的平衡弱化。

一时期研究课题证明，尽管平衡性T细胞会(Treg)需求量正常，但哮喘症状存在一些特性局限性，其中都除此以外对IL-2的底物能力减小。此外，哮喘症状中都的现像CD4+T细胞会确实对平衡更具抵抗性，表现为现像T细胞会的消除移向，自然激发的Treg和本体外激发的诱发Treg，以及上皮细胞会境况的CD4+T细胞会中都IL-2底物移向。本研究课题的意在是揭示了CD4+平衡性T细胞会(Treg)在一小群极较快十分困难者中都的形态，他们的平均年龄为43岁(31-72岁)，随访时间为18-32年。

方法：BOX研究课题是一项以人群为基础的斜向研究课题，在21岁以下确诊的症状亲族中都反应器对1型号哮喘的危险因素。我们之前揭示了长期较快十分困难者的形态，他们维持多重胰脏自身抗本体非典型号超过10年，但无法不止现哮喘的临床研究病因，慢速性或非顺利完成性免疫性。随后，10名暂时维持无哮喘并想要给予大量血液采样的较快十分困难者纳入T和B细胞会特性统计分析。在现阶段的研究课题中都，8名慢速十分困难者(SP组成员)，中都位年龄43岁(31-72岁)，18 - 32岁两者之间的胰脏自身抗本体非典型号。所有的旁观者都处于1型号哮喘十分困难的1期，尽管一些人随后无法管控了胰脏自身抗本体对某些上皮细胞会的非典型号底物，然而，一名症状已经处于2期多于6年，但无法不止现临床研究病因，一名症状被病因为哮喘，该受试者72岁，在挖掘检验采样时，其HbA1c增大到53 mmol/mol(7%)，在数据统计分析中都对该供本体顺利完成了单独评量。分离外周血单个反应器细胞会(PBMCs)，采用多参数流式细胞会拳法和T细胞会消除实验评量供本体中都Treg的高频率、基因型号和特性。可用FlowSOM和CITRUS(聚类反应器对、比如说和转回)顺利完成无监理聚类统计分析，评量Treg基因型号。

结果：与卫生供本体正因如此，来自慢速十分困难本体的清醒CD4+T细胞会的监理聚类推断，激活的清醒CD4+ Treg高频率减小，与糖皮质激素诱发的TNFR具体受体(GITR)表述减小有关。一名HbA1c增大的症状与十分困难较快者和匹配的实验组成员正因如此，Treg谱有所相异。特性统计分析证明，与卫生供本体正因如此，来自较快十分困难本体的Treg介导的CD4+现像T细胞会消除明显毁损。表现为对现像CD4+T细胞会CD25和CD134表述的消除减小。

三幅1 深入的基因型号统计分析推断，CD4+Treg亚型号在慢速十分困难缓冲区中都减小。由FlowSOM生成的Treg室，聚集在来自所有供本体的活CD4+CD45RA -细胞会上。根据上标物表述反应器对不止10个元簇:清醒T细胞会_1;清醒T cell_2;清醒T cell_3;清醒T cell_4;CD49b清醒T细胞会;HLA-DR + GITR +清醒T细胞会;线程Treg_1;线程Treg_2;线程Treg_3;和线程Treg_4。(a)可用9个相异Treg上标生成的10个元簇的MST。每个链表均是由一个协同(100个协同)，更大的元协同(10个元协同)在链表组成员周围上色。每个链表中都的饼三幅坚称单个上标的表述级别。(b)每个元聚类的热三幅，以推断整本体上标表述。(c, d)为HD组成员(c)和SP组成员(d)生成三幅，以及FlowSOM识别系统的每个元簇的大块。(e-l)比起总质量为每个metacluster装有该三幅表(总质量> 0.05%)确定为HD和SP组成员:线程Treg_2 (e),线程Treg_3 (f),线程Treg_4 (g), HLA-DR + GITR +清醒T细胞会(h)、清醒T cell_1(i),清醒T cell_2 (j),清醒T cell_3 (k) n d CD49b清醒T细胞会(l)。红色橘色均是由**SP 606。**p< 0.01, Wilcoxon以此类推大写字母秩检验。此键适用于三幅形部分(a)， (c)， (d)和d (e-l)

三幅2 可用CITRUS的预测模型号得出结论，Treg高频率的减小是十分困难较快的标志。PG具体联(a - f)和柑桔统计分析(g-k)并不SP旁观者和匹配的HD旁观者在CD4+CD45RA−T细胞会上的相异。(a)长子代CD25+ cd127 lotreg和CD25loCD127+T c e l群本体的均是由性三幅。CD25+ cd127lotreg被CD39和FOXP3富集，然后通过HLA-DR和GITR表述顺利完成分离，模拟FlowSOM群本体。(b) HD(黑点)和SP(布氏)组成员以及供本体SP 606(红色)中都CD25+ cd127的高频率反应器心内容三幅。(c-f) CD25+CD127loCD39+FOXP3+和CD25loCD127+具体联长子集的装有该三幅表;(c) HLA-DRloGITR−(线程Treg_2)， (d) HLA-DRintGITRlo(线程Treg_3)， (e) HLA- d RhiGITR+(线程Treg_4)， (f) HLA- d RhiGITR+(HLA-DR+GITR+线程T cell)。(g - i)果树簇螺旋由(g) CD127， (h) CD25和(i) FOXP3表述其中心着色，箭头突不止的簇被识别系统为SP和HD缓冲区两者之间的相异。(j)装有该三幅表推断了在SP(布氏)和HD(灰点)组成员中都，CITRUS清醒Treg_3和Treg_4的比起总质量(比例)。(k)直方三幅推断每个簇的基因型号(粉色)和Treg上标比起表述与背景表述(浅蓝色);上列，线程Treg_3;下面动身，线程Treg_4。背景与所有其他簇中都上标的表述有关。*p< 0.05， **p< 0.01, Wilcoxon以此类推大写字母秩检验

三幅3 与卫生献血者正因如此，十分困难较快者清醒treg的GITR减小。每个清醒CD4+T细胞会元簇(清醒T细胞会_1;清醒T cell_2;清醒T cell_3;CD49b +清醒T细胞会;HLA-DR + GITR +清醒T细胞会;线程Treg_2;线程Treg_3;来自FlowSOM的memory Treg_4)样品每个表述上标的改变。(a,b)来自HD (a)和S (b)缓冲区的表述热三幅(sp606不除此以外在内)。(c,d)清醒Treg_4元簇中都所有HD(蓝灰色)、所有SP(浅蓝色)和SP 606(红色)的FlowSOM GITR表述串联，推断直方三幅(c)和反应器心内容三幅(d)。Wilcoxon以此类推大写字母秩和检验，p< 0.07(红色)所有供本体除此以外，p< 0.05(浅蓝色)供本体SP 606和匹配的HD不除此以外在测试中都。(e,f) HLA-DRhiGITR+Tregs中都GITR表述，从PG具体联，从所有HD(蓝灰色)、所有SP(浅蓝色)和SP 606(红色)串联，推断直方三幅(e)和反应器心内容三幅(f) *p< 0.05, Wilcoxon以此类推大写字母秩检验

三幅4 来自较快十分困难的CD4+ treg细胞会管控现像CD4+T细胞会的能力减小。SP组成员用浅蓝色的该线和橘色坚称，HD组成员用银色的该线和橘色坚称，红色的该线/橘色坚称供本体sp606。可用CD4+CD25+ Treg分选试剂盒对CD4+T细胞会顺利完成分选。CD4+CD25−(这样的话者)被上标为CFSE, Treg按掩蔽的比例滴定。用抗CD3 /28微珠再造细胞会，培育3天内顺利完成流式细胞会拳法样品。(a-d)与CD4+这样的话者比起应的treg培育(自本体)(e-h) HD、SP或SP 606 Treg与HD这样的话者培育。(a,b,f) CFSE增生(a,e)和CFSE消除百份(b,f)。(c, d,h) CD25 (c,g)和CD134 (d,h)的消除百份。可用非典型号比对(激活的拥护细胞会不含treg)计算消除百份。*p< 0.05， **p< 0.01， ***p< 0.001，重复测量双向方差统计分析。†p < 0.0 5 Bonferroni的事后多重并不测试

三幅5 现像CD4+T细胞会对较快十分困难的T细胞会再造的消除更敏感。SP组成员用浅蓝色的该线和橘色坚称，HD组成员用银色的该线和橘色坚称，红色的该线/橘色坚称供本体sp606。可用CD4+CD25+Treg分选试剂盒对CD4+T细胞会顺利完成分选。CD4+CD25−(这样的话者)被cfsel上标，treg按掩蔽的比例滴定。用抗CD3 /28微珠再造细胞会，培育3天内顺利完成流式细胞会拳法(CD25反染)和细胞会因长子统计分析。HD Treg与HD、SP或sp606这样的话者共同培育。(a,b) CFSE增生(a)和CFSE消除百份(b)。(c,d) CD25消除百份(c)和CD134消除百份(d)。(e,f) IFN-γ(e)和IL-17A (f)在五小中都的表述。***p< 0.001， **p< 0.01，重复测量双向方差统计分析。†p < 0.0 5 Bonferroni的事后多重并不测试

得出结论：我们得不止的得出结论是，来自较快十分困难长子的再造清醒CD4+Treg在GITR表述中都得不到了扩展和丰富，强调了全面性研究课题Treg在1型号哮喘风险个本体中都的异质性的合理性。

原文不止处：

Boldison J, Long AE, Aitken RJ,et al.Activated but functionally impaired memory Tregs are expanded in slow progressors to type 1 diabetes.Diabetologia 2021 Oct 28